【膽固醇檢測】

目前，有關食品中膽固醇的測定方法主要有氣相色譜法，高效液相色譜法，比色法。這些方法都可以完成膽固醇的檢測，但樣品基質(zhì)復雜，目標物含量低導致分析結果不理想，而采用凝膠滲透色譜法（GPC）對樣品進行前處理，可以有效解決上述問題。

凝膠滲透色譜法采用惰性多孔材料為固定相，利用空間排阻效應將分子大小不同的物質(zhì)分離，達到制備純化的目的。本文采用全自動凝膠凈化系統(tǒng)，提取目標物膽固醇，用高效液相色譜儀進行測定，從而建立一個簡單，快捷，準確的食用油中膽固醇的測定方法。

【試劑】

1.膽固醇標品（99%）

2.甲醇（HPLC）

3.乙酸乙酯（分析純）

4.環(huán)己烷（分析純）

5.石油醚（分析純）

6.水（超純水）

【儀器設備】

1.SGPCS-凝膠凈化系統(tǒng)

2.凝膠滲透色譜柱

3.LC10高效液相色譜儀（等度）

4.旋轉蒸發(fā)儀

【含量測定】

標準溶液制備

準確稱取膽固醇標準品0.05g，用無水乙醇溶解并定容至 50ml作為標準儲備液放置0~4℃冰箱中備用。

膽固醇標準溶液：分別吸取標準儲備液(1.0mg/ml)25ul、50ul、100ul、500ul、2000ul，用無水乙醇定容至10ml，現(xiàn)配現(xiàn)用。

試樣的制備

分別稱取0.5g植物油和0.5g鮮奶，用等體積混合的環(huán)己烷和乙酸乙酯混合溶劑定容至5ml，供后續(xù)分離凈化使用。抽取試樣注入凝膠凈化系統(tǒng)，流動相：等體積混合的環(huán)己烷和乙酸乙酯溶液，流速：5ml/min,收集7.5-16.5min餾分于試劑瓶中，然后移至旋轉蒸發(fā)儀中蒸發(fā)至干，加入5ml乙醇溶解，供HPLC檢測用。

【色譜條件】

色譜柱:C18  250mm*4.6mm  粒度5um

流動相：乙醇

流速：1.0ml/min

紫外檢測器波長：208nm

【譜圖】