常見(jiàn)引起色譜峰異常的因素有:
1.色譜柱連接管路不正確;2.連接件卡進(jìn)柱子后客戶的處理;3.HPLC常用色譜柱接頭;4.色譜柱活化不到位;5.不同品質(zhì)試驗(yàn)用水導(dǎo)致鬼峰;6.柱溫的應(yīng)用
色譜柱連接管路不正確
連接件卡住后客戶的處理:
HPLC常用色譜柱接頭:
樣品:
1.苯丙氨酸 2.5-苯基-3,6-二氧-2-哌嗪乙酸
3.Asp-Phe 4.天冬甜素
色譜柱活化不到位:
新色譜柱和長(zhǎng)時(shí)間不適用的色譜柱都建議活化
活化的重要性
1)運(yùn)輸或儲(chǔ)存過(guò)程中不可避免干涸掉的填料盡可能盡可能的浸潤(rùn),使填料恢復(fù)活性;
2)不同品牌溶劑之間的差異,可能引起噪音增加,漂移增大,盡可能的置換掉保存溶劑;
3)加大進(jìn)樣量或者連續(xù)多次進(jìn)樣的方式,屏蔽掉系統(tǒng)和柱子的活性點(diǎn),避免對(duì)樣品峰形產(chǎn)生影響。
活化的注意事項(xiàng):
1)柱子中的保存液體與使用的流動(dòng)相之間要互溶,如果不溶請(qǐng)使用中介流動(dòng)相(異丙醇,或4-二噁烷等),由于中介流動(dòng)相黏度大,請(qǐng)使用低流速;
2)使用廠家推薦的活化程序;
活化推薦步驟:
反相柱(流速:0.5ml/min,每個(gè)步驟時(shí)間:120min):
100%甲醇(或乙腈)—60%甲醇(或乙腈)—20%甲醇(或乙腈)——60%甲醇(或乙腈)—100%甲醇(或乙腈)
正相柱(流速:0.5ml/min,每個(gè)步驟時(shí)間:120min)::100%甲醇(或乙腈):
正相條件使用:
正己烷—流動(dòng)相
反相條件使用:
異丙醇—乙腈—60%乙腈
H型強(qiáng)陽(yáng)離子交換磺化交聯(lián)苯乙烯-二乙烯基笨共聚填充劑:
PH=2.5硫酸水溶液,85℃,0.5ml/min,12小時(shí)以上。
不同品質(zhì)實(shí)驗(yàn)用水導(dǎo)致鬼峰: